پایان نامه کارشناسی ارشد: بررسی فاکتورهای موثر در باززایی درون شیشه ای مریم گلی کبیر |
فهرست مطالب:
فصل اول
1- مقدمه و ………………………………………………………………………………………………………………1
1-1- اهمیت گیاهان …………………………………………………………………………………………………………………1
2-1- پراکنش، تارخچه.و کاربردهای مرسوم گونه های مریم گلی کبیر …………………………………………………………………………2
3-1- خصوصیات گیاهشناسی مریم گلی کبیر……………………………………………………………………..3
4-1- نیازهای اکولوژیکی مریم گلی کبیر…………………………………………………………………………….3
5-1- خواص درمانی مریم گلی کبیر………………………………………………………………………………..4
6-1- ترکیبات شیمیایی …………………………………………………………………………………………4
7-1- کشت بافت………………………………………………………………………………………………….5
8-1- اهمیت وکاربردهای کشت بافت در باغبانی…………………………………………………………………………………………6
9-1- اهمیت وکاربردهای کشت بافت در گیاهان دارویی………………………………………………………………………..7
10-1- هدف ار انجام تحقیق……………………………………………………………………………………………………..8
فصل دوم
2- بررسی منابع علمی………………………………………………………………………………………………………………………..9
1-2- ریزازدیادی درون شیشه ای………………………………………………………………………………………………………9
2-2- اثرات نوع محیط کشت بر باززایی…………………………………………………………………………………….9
3-2- اثرات نوع ریزنمونه بر باززایی…………………………………………………………………………………………………………….12
4-2- ریشه زایی…………………………………………………………………………………………………………………………………..14
فصل سوم
3- مواد و روش ………………………………………………….15
1-3- مکان و زمان انجام تحقیق………………………………………………………………………………………………………15
2-3- آماده سازی محیط کشت………………………………………………………………………………………………………15
1-2-3- محلول های ذخیره مواد معدنی محیط کشت MS……………………………………………………………………………………………………………..16
2-2-3- محلول های ذخیره مواد تنظیم کننده رشدی…………………………………………………………………………………………………………………….17
3-2-3- محلول ذخیره کیتوسان……………………………………………………………………………………………………..17
4-2-3- سایر مواد…………………………………………………………………………………………………………………………..17
3-3- ضدعفونی بذر……………………………………………………………………………………………………………..17
4-3- کاشت بذر و شرایط نگهداری ………………………………………………………………………………………………………18
5-3- تهیه ریزنمونه………………………………………………………………………….18
6-3- آزمایش1: تعیین اثر محیط کشت در جوانهزنی بذور گیاه مریمگلیکبیر ………………………………………………………………………………19
7-3- آزمایش2: بررسی اثر نوع ریزنمونه و محیط کشت بر القاء جوانه و باززایی شاخساره مریمگلیکبیر………………………………………19
8-3-آزمایش3: بررسی اثر نوع و ترکیبات هورمونی بر القاء جوانه و باززایی شاخساره مریمگلیکبیر………………………………………………20
9- 3- کاشت ریزنمونه…………………………………………………………………………………………………………………………………21
10-3- آزمایش 4: بررسی اثر غلظت نمک در محیط کشت پایه MS و تیمار هورمونی بر ریشهرایی شاخسارههای باززاشده مریمگلیکبیر ………………………………….21
11-3- صفات مورد ارزیابی …………………………………22
12-3- طرح آزمایشی و تجزیه آماری داده ها …………………………………………………………………………23
فصل چهارم
4- نتایج…………………………………………………………………………………………………………………24
1-4- آزمایش 1: جوانه زنی …………………………………………………………………………………………………24
1-1-4- اثر زمانهای مختلف ضدعفونی بر درصد و سرعت جوانهزنی …………………………………………………………………………………………….24
2-1-4- اثر محیطهای مختلف کشت بر درصد و سرعت جوانهزنی …………………………………………………………………………………………………25
3-1-4- اثر غلظتهای مختلف کیتوسان بر درصد و سرعت جوانهزنی ……………………………………………………………………………………………26
4-1-4- اثر سطوح مختلف pH بر درصد و سرعت جوانهزنی …………………………………………………………………………………………………………..27
2-4- القاء جوانه و باززایی مستقیم …………………………………………………………………………………………………28
3-4- آزمایش 2: بررسی اثر نوع ریزنمونه و محیط کشت بر القاء جوانه و باززایی شاخساره مریمگلیکبیر ……………………………………29
1-3-4- تأثیر نوع ریزنمونه و محیط کشت بر القاء جوانه…………………………………………………………………………………………………………………30
1-1-3-4- تأثیر نوع ریزنمونه بر القاء جوانه در محیط حاوی BAP ……………………………………………………………………………………………….30
2-1-3-4- تأثیر نوع ریزنمونه بر القاء جوانه در محیط حاوی Kin …………………………………………………………………………………………………31
3-1-3-4- تأثیر نوع ریزنمونه بر القاء جوانه در محیط حاوی TDZ………………………………………………………………………………………………..33
2-3-4- تأثیر نوع ریزنمونه و محیط کشت بر باززایی شاخه……………………………………………………………………………………………………………..34
1-2-3-4- تأثیر نوع ریزنمونه بر باززایی شاخه در محیط حاوی BAP ………………………………………………………………………………………….34
2-2-3-4- تأثیر نوع ریزنمونه بر باززایی شاخه در محیط حاوی Kin …………………………………………………………………………………………….36
3-2-3-4- تأثیر نوع ریزنمونه بر باززایی شاخه در محیط حاوی TDZ ………………………………………………………………………………………….38
4-4- آزمایش 3: بررسی اثر نوع و ترکیبات هورمونی بر القاء جوانه و باززایی شاخساره مریمگلیکبیر …………………………………………39
1-4-4- اثر ترکیبات و غلظتهای مختلف تنظیمکننده های رشد بر القاء جوانه از ریزنمونه گره مریمگلیکبیر……………………………..40
2-4-4- اثر ترکیبات و غلظتهای مختلف تنظیمکننده های رشد بر القاء جوانه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر…………………44
3-4-4- اثر ترکیبات و غلظتهای مختلف تنظیمکننده های رشد بر باززایی شاخه از ریزنمونه گره مریمگلیکبیر ……………………….48
4-4-4- اثر ترکیبات و غلظتهای مختلف تنظیمکننده های رشد بر باززایی شاخه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر…………….52
5-4- آزمایش 4: بررسی اثر غلظت نمک در محیط کشت پایه MS و تیمار هورمونی بر ریشهزایی شاخسارههای باززاشده مریمگلیکبیر
……………………………………………………………………………………………………………………………………56
6-4- ………………………………………………………………………………………………………………….59
فصل پنجم
5- بحث…………………………………………………………………………………………………………………………60
1-5- جوانه زنی…………………………………………………………………………………………………………………….60
2-5- اثرات نوع ریزنمونه در باززایی……………………………………………………………………………………………………………………………………………………61
3-5- اثرات نوع و غلظت تنظیمکننده های رشد گیاهی بر باززایی…………………………………………………………………………………………………….64
4-5- اثرات ترکیبات مختلف تنظیمکننده های رشد گیاهی بر ریشهزایی…………………………………………………………………………………………66
5-5- نتیجه گیری کلی ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..68
6-5- پیشنهادات ………………………………………………………………………………………………………………………………………..69
منابع………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….70
فهرست جداول
جدول1-3: ترکیب محلول های ذخیره پنج نمک غیر آلی در فرمولاسیون موراشیگ و اسکوگ (1962) ……………………….16
جدول 2-3: ترکیبات مختلف تنظیمکننده های رشد گیاهی مورد استفاده در القای جوانه و باززایی شاخساره از ریزنمونه های مورد استفاده در مریم گلی کبیر…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………20
جدول 1-4: درصد و سرعت جوانه زنی بذور مریم گلی کبیر در محیط های مختلف MS، WA وWFP……………………………………..25
جدول 2-4: اثر سطوح مختلف pH بر سرعت و درصد جوانه زنی بذور مریم گلی کبیر. ……………………………………………………………….28
جدول 3-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متفابل نوع ریزنمونه و BAP بر القاء جوانه در گیاه مریم گلی کبیر………………………………30
جدول 4-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع ریزنمونه و Kin بر القاء جوانه در گیاه مریم گلی کبیر…………………………….32
جدول 5-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع ریزنمونه و TDZ بر القاء جوانه در گیاه مریم گلی کبیر……………………………..33
جول 6-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع ریزنمونه و BAP بر باززایی شاخه در گیاه مریمگلیکبیر……………………………….35
جدول 7-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع ریزنمونه و Kin بر باززایی شاخه در گیاه مریمگلیکبیر………………………………37
جدول 8-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع ریزنمونه و TDZ بر باززایی شاخه در گیاه مریمگلیکبیر…………………………….38
جدول 9-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع و غلظت تنظیمکننده های رشد IAA و BAP بر القاء جوانه از ریزنمونه گره مریمگلیکبیر………………………………………………………………………………………………………..39
جدول 10-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع و غلظت تنظیمکننده های رشد IAA و Kin بر القاء جوانه از ریزنمونه گره مریمگلیکبیر…………………………………………………………………………………………………………………………………………………….42
جدول 11-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع و غلظت تنظیمکننده های رشد IAA و TDZ بر القاء جوانه از ریزنمونه گره مریمگلیکبیر………………………………………………………………………………………….43
12-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع و غلظت تنظیمکننده های رشدIAA و BAP بر القاء جوانه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر………………………………………………………………………………………………………45
جدول 13-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع و غلظت تنظیمکننده های رشد IAA و Kin بر القاء جوانه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر………………………………………………………………………………………………………46
جدول 14-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع و غلظت تنظیمکننده های رشد IAA و TDZ بر القاء جوانه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….48
جدول 15-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع و غلظت تنظیمکننده های رشد IAA و BAP بر باززایی شاخه از ریزنمونه گره مریمگلیکبیر……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….49
جدول 16-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع و غلظت تنظیمکننده های رشد IAA و Kin بر باززایی شاخه از ریزنمونه گره مریمگلیکبیر……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….50
جدول 17-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع و غلظت تنظیمکننده های رشد IAA و TDZ بر باززایی شاخه از ریزنمونه گره مریمگلیکبیر……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….51
جدول 18-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع و غلظت تنظیمکننده های رشد IAA و BAP بر باززایی شاخه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………53
جدول 19-4- جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع و غلظت تنظیمکننده های رشد IAA و Kin بر باززایی شاخه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………54
جدول 20-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل نوع و غلظت تنظیمکننده های رشد IAA و TDZ بر باززایی شاخه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………56
جدول 21-4: جدول تجزیه واریانس اثرات متقابل غلظت نمک در محیط کشت پایه MS و تیمار هورمونی بر میانگین تعداد ریشه و طول ریشه در گیاه مریمگلیکبیر ………………………………………………………………………………………………………………………………………………….57
فهرست اشکال
شکل 1-3: ریزنمونه های تهیه شده از گیاهچه های حاصل از کشت بذور ضدعفونی شده در شرایط استریل………………………………..19
شکل 1-4: اثر غلظتهای مختلف کیتوسان بر رنگ برگ و اندازه طول گیاهچههای مریمگلیکبیر در محیط پایه MS ………………27
شکل 2-4: ریزنمونههای هیپوکوتیل و کوتیلدون مریمگلیکبیر قرارگرفته در محیط باززایی که پس از حدود یک ماه، سیاه شده و از بین رفتند…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………28
شکل 3-4: القاء جوانه و باززایی شاخساره در ریزنمونه گره در محیط کشت MS حاوی تنظیمکننده های رشد…………………………….29
شکل 4-4: ریشه زایی و سازگاری. ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………59
فهرست نمودارها
نمودار 1-4: اثر زمان های مختلف استریلیزاسیون بر سرعت و درصد جوانه زنی در بذور مریمگلیکبی…………………………………………25
نمودار 2-4: اثر غلظتهای مختلف کیتوسان بر سرعت و درصد جوانهزنی بذور مریمگلیکبیر ……………………………………………………26
نمودار 3-4: پاسخ نوع ریزنمونه مریمگلیکبیر بر میانگین تعداد جوانه القا شده در محیط MS حاوی غلظتهای مختلف BAP..31
نمودار 4-4: اثر غلظتهای مختلف BAP بر میانگین القاء جوانه در گیاه مریمگلیکبیر در محیط MS ……………………………………….31
نمودار 5-4: مقایسه میانگینهای برشدهی اثر متقابل نوع ریزنمونه و تیمار هورمونی Kin بر القاء جوانه در گیاه مریمگلیکبیر…32
نمودار 6-4: مقایسه میانگین اثر نوع ریزنمونه مریمگلیکبیر بر میانگین تعداد جوانه القا شده در محیط MS حاوی غلظت های مختلف TDZ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..34
نمودار 7-4: مقایسه میانگین اثر غلظتهای مختلف TDZ بر القاء جوانه در گیاه مریمگلیکبیر ……………………………………………………34
نمودار 8-4: مقایسه میانگین اثر نوع ریزنمونه مریمگلیکبیر بر میانگین شاخه باززایی شده در محیط MS حاوی غلظتهای مختلف BAP ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..35
نمودار 9-4: مقایسه میانگین اثر غلظتهای مختلف BAP بر باززایی شاخه در گیاه مریمگلیکبیر ……………………………………………..36
نمودار 10-4: مقایسه میانگینهای برشدهی اثر متقابل نوع ریزنمونه و Kin بر باززایی شاخه در گیاه مریمگلیکبیر…………………..37
نمودار 11-4: مقایسه میانگین اثر نوع ریزنمونه بر میانگین شاخه باززایی شده مریمگلیکبیر در محیط MS حاوی غلظتهای مختلف TDZ ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..39
نمودار 12-4: مقایسه میانگین اثر غلظتهای مختلف TDZ بر باززایی شاخه مریمگلیکبیر در محیط MS ………………………………..39
نمودار 13-4: مقایسه میانگین اثر ساده غلظتهای مختلف هورمون BAP بر القاء جوانه از ریزنمونه گره مریمگلیکبیر………………41
نمودار 14-4: مقایسه میانگینهای برشدهی اثر متقابل غلظتهای مختلف تنظیمکننده های رشد Kin و IAA بر القاء جوانه از ریزنمونه گره مریمگلیکبیر…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………42
نمودار 15-4: مقایسه میانگینهای برشدهی اثر متقابل غلظتهای مختلف تنظیمکننده های رشد TDZ و IAA بر القاء جوانه از ریزنمونه گره مریمگلیکبیر…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………44
نمودار 16-4: مقایسه میانگینهای برشدهی اثر متقابل غلظتهای مختلف تنظیمکننده های رشد BAP و IAA بر القاء جوانه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر……………………………………………………………………………………………………………………………………………………..45
نمودار 17-4: مقایسه میانگین اثر ساده غلظتهای مختلف Kin بر القاء جوانه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر…………………..47
نمودار 18-4: مقایسه میانگین اثر ساده غلظتهای مختلف IAA بر القاء جوانه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر…………………47
نمودار 19-4: مقایسه میانگین اثر ساده غلظتهای مختلف TDZ بر القاء جوانه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر………………..48
نمودار 20-4: مقایسه میانگین اثر ساده غلظتهای مختلف BAP بر باززایی شاخه از ریزنمونه گره مریمگلی کبیر………………………49
نمودار 21-4: مقایسه میانگین اثر ساده غلظتهای مختلف Kin بر باززایی شاخه از ریزنمونه گره مریمگلیکبیر………………………….50
نمودار 22-4: مقایسه میانگینهای برشدهی اثر متقابل غلظتهای مختلف تنظیمکننده های رشد TDZ و IAA بر باززایی شاخه از ریزنمونه گره مریمگلیکبیر……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..52
نمودار 23-4: مقایسه میانگین اثر ساده غلظتهای مختلف BAP بر باززایی شاخه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلی کبیر………….53
نمودار 24-4: : مقایسه میانگینهای برشدهی اثر متقابل غلظتهای مختلف تنظیمکننده های رشد Kin و IAA بر باززایی شاخه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر………………………………………………………………………………………………………………………………………………….55
نمودار 25-4: مقایسه میانگین اثر ساده غلظتهای مختلف TDZ بر باززایی شاخه از ریزنمونه نوک شاخه مریمگلیکبیر……………56
نمودار 26-4: اثر محیطهای مختلف ریشهزایی بر میانگین تعداد ریشه های تولید شده در محیط کشت MS حاوی غلظتهای مختلف IAA و IBA در مریمگلیکبیر………………………………………………………………………………………………………………………………………………58
نمودار 27-4: اثر محیطهای مختلف ریشهزایی بر میانگین طول ریشه های تولید شده در محیط کشت MS حاوی غلظتهای مختلف IAA و IBA در مریمگلیکبیر ……………………………………………………………………………………………………………………………………………58
چکیده
جنس Salvia متعلق به خانواده Lamiaceae است که شامل گونه های متعددی میباشد. در طب سنتی و در تجارت به خصوص در تولید اسانس و به عنوان چاشنی و طعم دهنده غذا، مریم گلی کبیر (Salvia sclarea L.) مورد استفاده قرار میگیرد. محل پراکنش این گیاه، حوزه مدیترانه و ایران معرفی شده است. اسانس یا مواد استخراج شده از قسمت های هوایی این گیاه، اثرات بسیاری در درمان بیماریها به عنوان مثال مسکن، ضد التهاب، آنتی اکسیدانت، ضد قارچ و ضد باکتری دارد. در این تحقیق القای جوانه و باززایی شاخه در شرایط درون شیشه ای با بهره گرفتن از ریزنمونههای مختلف (گره، نوک شاخه، هیپوکوتیل و کوتیلدون) در گیاه مریمگلیکبیر مورد مطالعه قرار گرفت. القای جوانه و باززایی شاخساره در محیط پایه MS تکمیل شده با 6- بنزیل آمینو پورین (BAP)، تیدیازورون (TDZ) و کینتین (Kin) درغلظتهای مختلف (0، 2/2، 4/4 و 8/8 میکرومولار)، در ترکیب با ایندول 3- استیک اسید (IAA) (0 و 1/1 میکرومولار) بدست آمد. در بررسی اثر نوع ریزنمونه بر جوانه القاشده و شاخه باززایی شده، مشاهده شدکه بیشترین تعداد جوانه القاشده و شاخه باززایی شده به ترتیب با میانگین 531/25 و 934/17 (جوانه و شاخه در هر تیمار) در ریزنمونه گره در محیط حاوی TDZ بدست آمد و کمترین میانگین جوانه القاشده (625/4 جوانه در هر تیمار) و شاخه باززایی شده (312/3 شاخه در هر تیمار) در ریزنمونه نوک شاخه در محیط حاوی Kin بدست آمد. در بررسی اثر نوع و غلظت تنظیم کننده های رشد گیاهی بر القای جوانه و باززایی شاخه، بیشترین میانگین جوانه القاشده (187/37 جوانه در هر تیمار) در غلظت 4/4 میکرومولار TDZ و بیشترین میانگین شاخه باززایی شده (053/26 شاخه در هر تیمار) در غلظت 8/8 میکرومولار TDZ در ریزنمونه گره تولید گردید. کمترین میانگین جوانه القاشده (1) و شاخه باززایی شده (1) در محیط کنترل و در ریزنمونه نوک شاخه تعیین گردید. شاخه های باززاشده در محیط ½ MS و MS تکمیل شده با غلظت های مختلف IAA و IBA (0، 5/0 و 1 میلیگرم در لیتر) در طی 4 هفته، ریشه دار شدند. مقایسه میانگینها نشان داد که هورمون IAA با مقدار 5/0 میلیگرم در لیتر با میانگین 55/2 ریشه، حداکثر میانگین تعداد ریشه را تولید کرد و حداقل میانگین تعداد ریشه در هورمون IBA با مقدار 5/0 میلیگرم در لیتر با میانگین 52/1 مشاهده گردید. در مقایسه میانگین اثرات تیمار هورمونی بر طول ریشه مشخص شد که تیمار شاهد با میانگین 65/5 سانتیمتر، بیشترین میانگین طول ریشه را داشت و تیمار IAA (1 میلیگرم بر لیتر) با میانگین 08/3 سانتی متر، کمترین میانگین طول ریشه را داشت. گیاهچه های ریشه دارشده در محیط ترکیبی پیت و پرلیت به نسبت (3به 1) و با رطوبت 100 درصد و با 90 درصد زندهمانی در شرایط گلخانه سازگار شدند.
مقدمه و کلیات
1-1- اهمیت گیاهان دارویی
سابقه درمان بیماریها با گیاهان دارویی به قدمت تاریخ زیست انسان بر روی کره زمین است و انسان همواره، به حکم تجربه، علم و اندیشه و بنا به مقتضیات، در طول حیات بر روی کره زمین، به کمک گیاهان دارویی خود را مداوا میکرده است. گیاهان دارویی منبع مهمی از ترکیبات برای صنعت داروسازی و طب سنتی هستند. حدود 80 درصد از مردم کشورهای در حال توسعه، به طور سنتی از داروهایی که از گیاهان مشتق شده اند، برای نیازهای مراقبتهای اولیه بهداشتی
فرم در حال بارگذاری ...
[یکشنبه 1399-09-30] [ 03:30:00 ب.ظ ]
|