شهریور    1393

 

 

 

 

فهرست مطالب

عنوان                                             صفحه

 

چکیده 1

1-1- مقدمه 3

1-2- بیان مسئله 4

1-3- مروری بر سابقه تحقیق 4

1-4- اهداف، فرضیات و سوالات تحقیق 6

1-4-1- اهداف تحقیق 6

1-4-1-1- هدف کلی 6

1-4-1-2- اهداف جزئی 6

1-4-2- فرضیات تحقیق 6

1-4-3- سئوالات تحقیق 6

1-5- روش تحقیق و پژوهش 7

انگل‌ها و بیماری‌های طیور و سایر پرندگان 9

2-1- انگلهای خارجی 9

2-1-1- ساسها 9

2-1-2- شپشهای گزنده 9

2-1-3- مگسهای سیاه 10

2-1-4- مایت‌های ماکیان 10

2-1-5- لارومایت ها 10

2-1-6- سوسک بستر و لارو آن آلفیتوبیوس دپاپرینوس 11

2-1-7- مایت‌های پر و مایت‌های ایجادکننده پرریزی 11

2-1-8- مایت‌های زیر پوستی 11

2-2- انگل‌های داخلی 12

2-2-1- کیسه ملتحمه 12

2-2-2- نای 13

2-2-4- پیش معده 14

2-2-5- سنگدان 14

2-2-6- روده باریک 15

2-2-7- روده کور 16

2-2-8- پوست 17

2-3- بیماری‌های انگلی طیور 17

2-3-1- کوکسیدیوز 17

2-3-2- کریپتوسپوریدیوز 20

2-3-3- هگزامیتیازیس 24

2-3-4- هیستومونیازیس 27

2-3-5- لکوسیتوزئونوز 32

2-4- واکنش زنجیر‌های پلی مراز( PCR ) 35

2-4-1- مواد و وسایل لازم برای انجام برای انجام آزمایش PCR 36

2-4-2- سنتز 36

2-4-3- تشخیص و تجزیه فراورده‌های PCR: 37

3-1- نمونه گیری 40

 

3-2- استخراج DNA از کبد با بهره گرفتن از کیت 40

3-3- استخراج DNA از خون با بهره گرفتن از کیت 41

3-4- آزمایش PCR 42

3-4-1- روش کار 42

3-5- تهیه ژل آگارز 43

3-5-1- مواد و وسایل لازم 43

3-5-2- روش تهیه بافر (1X) TBEبرای تهیه ژل آگارز 44

3-5-3- روش تهیه ژل آگارز 44

3-5-4- روش انجام الکتروفورز 44

3-5-5- آنالیز محصول PCR: 45

3-6- آزمایشات هیستوپاتولوژی 45

3-6-1- رنگ آمیزی هماتوکسیلین-ائوزین (H&E) : 45

3-6-2- روش رنگ آمیزی اسلاید با رنگ (H&E) : 46

3-6-3- تفسیر رنگ آمیزی (H&E) 47

3-6-4- نتایج رنگ آمیزی (H&E) 48

4-1- نتایج کیفی مربوط به استخراج DNA 50

4-2- نتایج آزمایشات هیستوپاتولوژی 51

 

 

 

5-1- بحث 53

5-2- پیشنهادات 56

منابع 57

 

 

فهرست شکل‌ها

عنوان                                             صفحه

 

شکل 4-1- الکتروفورز محصولات PCR به منظور تکثیر ژن انگل هیستومونیازیس در نمونه‌های خون و کبد بوقلمون بر روی ژل آگارز 1%. 50

شکل 4-2- مشاهده مقاطع انگل هیستوموناد در بین هپاتوسیت‌های کبدی. 51

 

فهرست جداول

عنوان                                             صفحه

 

جدول 4-1- مقایسه روش ردیابی از طریق PCR و آزمایشات هیستوپاتولوژی 51

 

 

 

 

 

چکیده

به منظور ردیابی هیستوموناس مله اگریدیس در بوقلمون‌های کشتار شده در استان اصفهان، 200 نمونه خون و 200 نمونه کبد در کشتارگاه اخذ شد و پس از استخراج DNA، قطعه 550 جفت بازی مربوط به ژن 18SRNA تکثیر شد. علاوه بر آن، نمونه‌های کبد در فرمالین 10% نگهداری و پس از تهیه مقاطع پاتولوژی رنگ آمیزی با هماتوکسیلین – ائوزین از نظر وجود انگل مورد بررسی قرار گرفت. نتایج PCR نشان داد از 200 نمونه خون، 18 نمونه (9%) و از تعداد 200 نمونه کبد، 32 نمونه (16%) از لحاظ هیستوموناس مله اگریدیس مثبت می‌باشد. نتایج هیستوپاتولوژی نشان داد از بین نمونه‌های PCR مثبت 76/11 % در هیستوپاتولوژی مثبت ارزیابی شدند لذا به نظر می‌رسد برای شناسایی هیستوموناس مله اگریدیس PCR از ویژگی بالایی برخوردار می‌باشد.

 

کلید واژه‌ها : بوقلمون، هیستوموناس مله اگریدیس، PCR، اصفهان.

 

 

 

 

 

فصل اول

 

«مقدمه و طرح تحقیق»

 

 

 

 

 

 

1-1- مقدمه

در دهه‌ های اخیر به دلیل رشد جوامع بشری، نیاز به منابع غذایی به خصوص اقلام پروتئینی حیوانی افزایش یافته است وپرورش بوقلمون به طور صنعتی به منظور رفع بخشی از این نیاز در سراسر جهان درحال گسترش می‌باشد.درسال2004 ایالات متحده باتولید 2592000 تن گوشت بوقلمون در رتبه نخست بوده است.درکشور ما نیز پرورش بوقلمون صنعتی در سال‌های اخیر رشد قابل توجهی داشته به طوری که تولید گوشت آن به صور مختلف قطعه بندی شده ویا لاشه قابل عرضه می‌باشد (5).

در ایران صنعت پرورش بوقلمون از سال1355 آغاز گردیده وهرساله به تعداد مزارع بوقلمون درکشور اضافه می‌شود (1).

باتوجه به خصوصیات پرورشی مناسب بوقلمون‌های گوشتی، نظیر میزان وزن گیری، سرعت رشد زیاد (74/10 کیلوگرم در16 هفتگی برای بوقلمون‌های ماده و 39/20 کیلوگرم در20 هفتگی برای بوقلمون‌های نر) ضریب تبدیل غذایی پایین،درصد اندک افت لاشه وارزش غذایی مناسب در مقایسه سایر طیور صنعتی،پرورش این پرنده به طور صنعتی به منظور رفع بخشی از این نیازها در سراسر جهان درحال گسترش است به طوری که در سال 2007 ایالات متحده، اتحادیه اروپا، برزیل و کانادا ازنظر تولید گوشت بوقلمون درسطح جهان به ترتیب دررتبه‌های اول تا چهارم قرار داشتند (7).

 

 

 

1-2- بیان مسئله

هیستومونیازیس [1] بیماری تک یاخته‌ای حاد است. هیستوموناس مله اگریدیس[2] تک تاژک است. تک‌یاخته‌های انگلی باعث هپاتیت سکوم می‌شوند.سایت‌های هجومی این انگل سکوم و کبد می‌باشد واختلال گردش خون درمراحل بعدی این بیماری به نظر می‌رسد وباعث یک بیماری سرسیاه در پرنده می‌شود.

در دهه‌ های اخیر هیستومونیازیس موجب شده است تا آسیب جدی به صنعت طیور، به ویژه در میان بوقلمون وارد شود. موارد کمی از بروز بیماری در ماکیان نیز گزارش شده است ولی ماکیان به علت مقاومت در مقابل بیماری، بیشتر